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HGC-27細(xì)胞培養(yǎng)指南 | 實(shí)驗(yàn)步驟與防污染技巧(新手必讀)

 更新時間:2025-03-11    點(diǎn)擊量:126

HGC-27細(xì)胞是一種來源于人胃癌患者轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)的低分化胃癌細(xì)胞系,具有較強(qiáng)的侵襲性和增殖能力,常用于研究胃癌的分子機(jī)制、藥物篩選以及侵襲與轉(zhuǎn)移特性分析。它在體外呈上皮樣貼壁生長,呈多角形或短梭形,以單層形式生長。能夠在免疫缺陷小鼠中形成移植瘤,是胃癌相關(guān)研究的重要模型。

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一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備(關(guān)鍵物料清單)

細(xì)胞來源:建議從ATCC/中科院細(xì)胞庫獲?。ㄅ柨伤菰矗?br style="--tw-border-spacing-x:0; --tw-border-spacing-y:0; --tw-translate-x:0; --tw-translate-y:0; --tw-rotate:0; --tw-skew-x:0; --tw-skew-y:0; --tw-scale-x:1; --tw-scale-y:1; --tw-pan-x: ; --tw-pan-y: ; --tw-pinch-zoom: ; --tw-scroll-snap-strictness:proximity; --tw-gradient-from-position: ; --tw-gradient-via-position: ; --tw-gradient-to-position: ; --tw-ordinal: ; --tw-slashed-zero: ; --tw-numeric-figure: ; --tw-numeric-spacing: ; --tw-numeric-fraction: ; --tw-ring-inset: ; --tw-ring-offset-width:0px; --tw-ring-offset-color:#fff; --tw-ring-color:#3b82f680; --tw-ring-offset-shadow:0 0 #0000; --tw-ring-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow-colored:0 0 #0000; --tw-blur: ; --tw-brightness: ; --tw-contrast: ; --tw-grayscale: ; --tw-hue-rotate: ; --tw-invert: ; --tw-saturate: ; --tw-sepia: ; --tw-drop-shadow: ; --tw-backdrop-blur: ; --tw-backdrop-brightness: ; --tw-backdrop-contrast: ; --tw-backdrop-grayscale: ; --tw-backdrop-hue-rotate: ; --tw-backdrop-invert: ; --tw-backdrop-opacity: ; --tw-backdrop-saturate: ; --tw-backdrop-sepia: ; box-sizing: inherit;"/>? 培養(yǎng)基:RPMI-1640 + 10% FBS + 1%雙抗(Gibco品牌優(yōu)選)
儀器:37℃恒溫CO?培養(yǎng)箱(CO?濃度5%)、生物安全柜(潔凈度100級)

二、詳細(xì)培養(yǎng)步驟

1. 復(fù)蘇操作

快速解凍37℃水浴≤2分鐘離心去DMSO1000rpm×5min重懸接種初始密度2×10? cells/cm2

?? 防凍傷要點(diǎn):解凍后立即轉(zhuǎn)移至預(yù)溫培養(yǎng)基

2. 傳代方法

  • 消化控制:0.25%胰酶(含EDTA)作用2-3分鐘(鏡下觀察細(xì)胞變圓)

  • 終止技巧:加入含血清培養(yǎng)基(體積≥3倍消化液)

  • 分瓶比例:1:3至1:4(24-48小時可達(dá)80%融合度)

3. 凍存方案

  • 凍存液配方:90% FBS + 10% DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)

  • 程序降溫:4℃ 30min → -20℃ 2h → 液氮長期保存

三、培養(yǎng)問題排查(附解決方案)

常見問題原因分析應(yīng)對措施
增殖緩慢血清批次差異/FBS濃度不足更換優(yōu)質(zhì)血清(≥南美產(chǎn)地)
細(xì)胞漂浮消化過度/支原體污染縮短消化時間/PCR檢測
黑點(diǎn)污染真菌孢子污染棄用全批+環(huán)境紫外滅菌

?? 注意事項(xiàng)(提升實(shí)驗(yàn)成功率)

  • 狀態(tài)監(jiān)控:每日觀察細(xì)胞形態(tài)(貼壁率<50%需排查)

  • 傳代周期:不超過30代(建議定期STR鑒定)

  • 污染預(yù)防:操作前紫外滅菌30min,試劑瓶酒精噴淋


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